Rođen je 2. septembra 1972. godine u Mostaru.
Odrastao je u Kruševcu i Užicu, a 1990. godine upisao je Fakultet dramskih umetnosti u Beogradu, u klasi profesora Vladimira Jevtovića. Nakon četiri godine je diplomirao, a 2009. godine postao je asistent na katedri za glumu.
Prvu ulogu na velikom platnu dobio je u filmu Gorana Paskaljevića „Tuđa Amerika“ iz 1995. godine. Iste godine Trifunović se pojavio u filmu „Ubistvo s predumišljajem“ Gorčina Stojanovića. Neke od najznačajnijih uloga odigrao je u filmskim ostvarenjima „Stršljen“ (1998), „Spasitelj“ (1998), „Munje!“ (2001), „Profesionalac“(2003) „Crni Gruja“ (2003), „Kad porastem biću kengur“ (2004), „Karaula“ (2006), „Srpski film“ (2010). Glumio je u brojnim pozorišnim predstavama, među kojima su: „Bure baruta“, „Šine“, „Porodične priče“, „Prokleta avlija“, „Tvrđava“, „Voz“.
Tokom ’90-ih godina 20. veka učestvovao je u demonstracijama protiv režima Slobodana Miloševića. Trifunović navodi da se priključivao kampanjama Demokratske stranke sa ciljem da Srpskoj radikalnoj stranci smanji šanse za pobedu.
U martu 2014. godine osnovao je humanitarnu organizaciju „Podrži život“. Kao osnovni cilj fondacije navodi se unapređenja socijalne i zdravstvene zaštite dece u Srbiji, putem sprovođenja različitih humanitarnih akcija radi prikupljanja potrebnih sredstava za lečenje dece, za operacije u zemlji i inostranstvu, kupovinu lekova i medicinskih pomagala.
Na izborima za predsednika Srbije 2017. javno je podržao Sašu Jankovića.
Tokom 2018. godine humanitarna organizacija „Podrži život“ i sam Sergej Trifunović, koji je otvoreno i javno kritikovao vlast SNS-a, našla se na meti vlasti pod optužbom da prikupljeni novac od sms poruka koristi za ostale troškove organizacije. Pošto je poziv za pomoć Trifunovićeve fondacije da se pomogne u lečenju dečaka Dušana Todorovića izazvao burnu reakciju javnosti i eksploziju humanosti, predsednik Srbije i SNS-a Aleksandar Vučić najavio je da će država donirati novac za lečenje dečaka. Obzirom da je ova Vučićeva najava stigla u momentu kada su sredstva za lečenje Dušana Todorovića već bila prikupljena, Trifunović je apelovao da se prikupljena sredstva preusmere na njegovu fondaciju u cilju lečenja druge dece, što se i dogodilo. Ovaj Vučićev potez Trifunović je ocenio kao marketinški trik i izjavio da ovo nije nikakvo trajno rešenje, i da je potreba sistemska promena. Nakon toga medije su preplavili tekstovi u kojima je na udaru Trifunović i njegova fondacija.
Na protestima „1 od pet miliona“, koji su počeli početkom decembra 2018. nakon prebijanja lidera Levice Srbije Borka Stefanovića u Kruševcu, imao je jednu od istaknutijih uloga.
U drugoj polovini januara 2019. objavljeno je da je, pored advokata Aleksandra Olenika, Trifunović kandidat za novog predsednika Pokreta slobodnih građana. Za predsednika PSG-a izabran je 26. januara 2019. godine, sa 60 odsto osvojenih glasova na izbornoj skupštini. Izbor novog predsednika PSG-a usledio je mesec dana pošto je Saša Janković podneo ostavku na tu funkciju.
U prvom obraćanju medijima nakon izbora, Trifunović je izjavio da će lično raditi na ujedinjenju opozicije, ali da PSG neće tehnički ući u Savez za Srbiju, već da će nastaviti saradnju sa svim opozicionim blokovima u zemlji, a posebno je istakao Lokalni front.
„Čeka nas dosta posla, dosta vraćanja ljudi koji su otišli, priključivanje novih ljudi, jer sve počiva na ljudima, kadrovska politika pod broj jedan. Vrlo je bitno da u ovoj atmosferi mraka, straha i bezumlja, osvestiti ljude i vratiti im dostojanstvo da oni zaista jesu slobodni građani, pripadali oni ovom pokretu ili ne. Ono na čemu ću lično raditi je ujedinjenje opozicije, sigurno nećemo ući u SZS, ali to ne znači da ne treba da sarađujemo sa svima. Ulazak u SZS nije volja ljudi u PSG, a ono gde sam ja prelomio da sebi uništim život i uđem u ovo je bila ogromna gomila ljudi koji su na neki način oprezni u strahu od nekih političkih igrača.“ (Danas Online, 26. 1. 2019. godine)
Već u danima posle izbora Trifunovića za predsednika pokreta, većina članova predsedništva PSG najavila je da će podneti ostavke, kao i da će deo njih napustiti pokret, nezadovoljan nagoveštenim promenama. Nekoliko nedelja kasnije, Olenik je najavio da će sa drugim kolegama koje su napustile PSG osnovati novi pokret, uz obrazloženje da „PSG odustaje od dosadašnje politike i približava se desničarima i nacionalistima iz Saveza za Srbiju“, što je suprotno sa građanskim načelima pokreta.
U martu 2019. našao se u centru skandala, kada je fizički napadnuta aktivistkinja Ksenija Radovanović. Radovanović je izjavila da je 8. marta na dodeli BeFem priznanja dobila udarac, pošto je reagovala na bahato ponašanje i verbalne uvrede nepoznatog muškaraca, koji je stajao sa grupom ljudi među kojima je bio i Sergej Trifunović. Trifunović je rekao da ne poznaje tu osobu, da je samo stajala nedaleko od njega i bila u društvu osobe koju poznaje iz viđenja i kojoj se javio, a da incident nije ni video, jer je bio okrenut leđima, te da je samo čuo vrisak. Zbog sumnje da je noći između 8. i 9. marta u Kulturnom centru Grad vređao, a potom i fizički napao Kseniju Radovanović, uhapšen je Petar Vladulović. Posle sporazuma o priznanju krivice, Vladulović je osuđen uslovno na osam meseci zatvora sa rokom provere od tri godine.
